电话:+86 (027)87660672
传真:+86 (027)59729696
 info@antgene.com.cn
地址:武汉市洪山区街道口京韵花园C座1201室

alamarBlue的用法

贴壁细胞和非贴壁细胞都适用。所有操作在无菌条件下进行。避免污染细胞,因为微生物污染也会还原alamarBlueTM,培养基中应添加抗生素如青霉素G(1U/ml)、两性霉素B(amphotericin B,0.0025ug/ml)。
 
氧化还原指示剂是pH敏感的,推荐使用磷酸缓冲液。10%胎牛血清对比色法检测无影响,但是会淬灭部分荧光;因此,用荧光法检测时对照溶液中需添加10%BSA。酚红对检测也有一定影响,结果会上调0.03%。一般来说,应使用非还原性的培养基,如RPMI1640、Hank’s-Eagle或 Dulbecco’s-Eagle。
 
在特殊系统中使用时,细胞密度、孵育时间、培养基成分及使用浓度等条件需要先优化。
收集需检测的细胞,以优化的密度铺于加入10%(v/v)alamarBlueTM的新鲜培养基上,
 
1、   细胞培养:RPMI培养基,添加HEPES、10%胎牛血清、1%谷氨酸盐、适当的抗生素;
2、   细胞覆盖率达80%时,用胰酶消化铺于微孔板中,密度在每孔825~80000个细胞。
3、   1个小时后,加入alamarBlueTM,37℃ 5%CO2培养
4、   到预定的时间点后检测alamarBlueTM的还原情况
注意:若检测的还原度不够,可选择继续培养再检测,这是该方法的一大优越之处
 
研究特殊药物对细胞周期的影响(如roscovitine,一种抗癌药、周期蛋白激酶抑制剂),胰酶消化细胞、收集并铺于含药物的培养基上,37℃ 5%CO2培养2天;除去之前的培养基换上含10%(v/v)alamarBlueTM的新培养基,在预定的时间点检测其还原度。
Copyright 2007-2009 安特捷生物技术有限公司. 版权所有 鄂ICP备09006201号-1在线咨询
Tel: +86 (027)87660672 Fax: +86 (027)59729696 Email:info@antgene.com.cn 武汉市洪山区街道口京韵花园C座1201室
访问和使用安特捷生物技术有限公司,即表明您已完全接受和服从我们的用户协议