RNeasy Protect ——我的样本保护神!
一旦生物样品被收集分离,它的RNA会立刻变得非常不稳定,极易被降解。由于特异及非特异的RNA降解,或者由于应激反应产生新的RNA都会引起RNA状态的改变。对于生物芯片、基因表达矩阵分析(Array Analysis)、定量RT-PCR等实验来说,采样后立即稳定样品里的RNA以保存当时RNA的表达状态,是精确/定量研究基因表达分析的重要前提。为了达到这个目的,往往需要将液氮或者干冰带到采样现场,采样后立即抽提RNA或者运回实验室保存。对于实验者来说非常不方便。
著名的QIAGEN公司最近新推出一种RNA抽提试剂:RNeasy Protect Kit,提供一整套RNA保护和分离试剂,从样品的制备到RNA的抽提,只需一个试剂盒即可解决所有问题。保证样品的表达信息不受破坏,确保得到可信的基因表达分析结果。
试剂盒里提供一种RNAlater RNA Stabilization Reagent,只要在采样后立即将新鲜样品浸入这种液体试剂,RNA保护剂可以迅速渗透到组织或其他生物样本中,稳定并保护RNA完整而不被降解,确保下游分析得到的数据真实反应样品的表达信息。保存在RNAlater中的样品RNA可以在37度下稳定保存1天,或者在18-25度保存7天,2-8度稳定4周,或者在-20度永久保存。这种技术为在不同温度下采样,运输和保存样品提供了极大的方便,特别适用于各种动物组织、培养细胞、细菌、白细胞,但必须说明的是它不适用于全血或体液中RNA的保存。
RNAlater的用法非常简单,只要在采样后立即将样品完全浸入适量(10ul/1mg组织)的RNAlater中即可。取样的动作要尽量快速利索,组织样品的大小以不超过0.5公分厚为宜,对于一些小的组织如小鼠的脾、肾等器官则可以整个取出浸入溶液中,较大的则应切开为厚度小于0.5公分的小块,以确保RNAlater 能迅速扩散渗透入组织块中的所有细胞中。采样的容器应该足够大以容纳10倍于组织重量的溶液,避免组织块挤在一起,同时建议将溶液加满容器以避免在运输过程中组织块露出液面。注意本试剂只适用于新鲜样品,对于冷藏和包埋的样品直接抽提RNA即可。另外对于RNA已经降解的样品,RNAlater只能保护剩下的样品RNA,不能修复已破坏的RNA。
保存后的样品可以直接用于RNA或者mRNA的抽提。RNAlater不会影响组织块的结构,可以在室温下切出适量的组织块用于称量和抽提RNA,剩下的部分可用于继续保存样品。-20度冻存的样品可以取出在室温下进行称量等操作而无需干冰。在-20°C冻存的样品反复冻融20次RNA依然保持完好无损。RNAlater处理的样品比新鲜组织稍微硬一点,但不会影响匀浆过程。取出适量的样品即可开始加RLT缓冲液进行匀浆化。
和传统的RNeasy Kit一样,RNeasy Protect Kits采用QIAGEN著名的硅胶膜纯化柱技术,迅速特异地吸附样品裂解液中的RNA,无需酚氯仿抽提,不用乙醇沉淀或LiCl沉淀,也不用CsCl超离,只要洗脱即可得到纯的RNA。通常情况下RNeasy的纯化技术足以除去绝大部分的DNA,而无需额外进行DNaes处理,但是对于一些对痕量DNA非常敏感的实验,用RNase-Free DNase Set(QIAGEN cat.no. 79254)可以直接在纯化柱上消化DNA残留,在随后的洗涤步骤中除去DNase,最后洗脱得到不含DNA的纯RNA。
QIAGEN并没有驻足于已有的成绩,在2009年还推出了新鲜样本保护剂系列,为您的样本提供更全面,更有针对性的保护。
RNAprotect Animal Blood Reagent
RNAprotect Bacterial Reagent
RNAprotect cell Reagent
RNAprotect Saliva Reagent
无需干冰,液氮即可分别立即稳定小动物(rat,mouse,rabbit)新鲜血液,细菌,分选或培养的细胞,唾液等样本。配合Rneasy Kit 使用,可以高效纯化RNA确保各种下游应用。
订购信息
名称 规格 货号
RNAlater RNA Stabilization Reagent 50ml/250ml 76104/6
RNAprotect Animal Blood Reagent 5*500ul 76554
RNAprotect Bacterial Reagent 2*100ml 76506
RNAprotect cell Reagent 250ml 76526
RNAprotect Saliva Reagent 50ml 74324