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Western Blot 不败技巧连载(一):如何选择蛋白分解抑制剂

 
            

只要短短的几分钟,蛋白酶就可以把花了好几天辛苦萃取出来的蛋白样品彻底地毁灭。蛋白质免疫印迹(WB)本来就是要用来检测样品里蛋白的多寡。如果这些蛋白质都被酶分解的话,即使后续的蛋白电泳做得再漂亮,恐怕也只是徒劳。                

所以在样品制备过程中,用蛋白分解抑制剂(protease inhibitors)抑制蛋白酶,是让样品保持最佳状态的主要关键。
了解如何根据每一种蛋白酶标靶来挑选不同种类的蛋白分解抑制剂,才能"知己知彼,百战百胜" !成功的WB,样品制备是关键。
                

 

(1) Leupeptin

标靶:Trypsin,Chymotrypsin, Pepsin, Thrombin, Calpain, Cathepsin B,H, Papain等

标准使用浓度:10-100 uM     溶剂:水

(2) PMSF

标靶:广泛的丝氨酸

标准使用浓度:0.1-1.0 uM     溶剂:无水乙醇或异丙醇

(3) Aprotinin

标靶:广泛的丝氨酸酶,除了Thrombin及Factor Xa

标准使用浓度:0.3 uM     溶剂:水

(4) AEBSF

标靶:广泛的丝氨酸酶

标准使用浓度:0.1-1.0 uM     溶剂:水


(1) E-64

标靶:广泛的半胱氨酸酶及Trypsin

标准使用浓度:1-10 uM     溶剂:水

(2) Chymostatin

标靶:Chymase, Cathepsin A,B,D,G, Papain.

标准使用浓度:10-100 uM     溶剂:二甲基亚砜(DMSO)


(1) Pepstatin A

标靶:Renin, Chymosin, Pepsin等

标准使用浓度:1 uM     溶剂:甲醇或二甲基亚砜(DMSO)


(1) EDTA

标靶:广泛的基质金属蛋白酶

标准使用浓度:1-10 mM     溶剂:水

(2) Bestatin

标靶:Aminopeptidase

标准使用浓度:1-10 uM     溶剂:甲醇

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